Нрепарат фермента, охлажденный до 0°С, буфер и добавки активаторов вводились в камеру, из нее эвакуировался воздух до остаточного давления 100 мм рт. ст., а затем камера запол- нялась до 1 атм. газообразным азотом, обогащенным изотопом No°. Обычно обогащение атмосферы в` камере изотопом No° (7) было близким к 11,5, если принять за единицу содер- жание изотопа No'5 в природном азоте. Камера помещалась в термостат с постоянной температурой 35°С. Во время опыта при помощи специального аппарата, установленного в термо- стате, камера непрерывно встряхивалась, что обеспечивало бо- лее интенсивный контакт фермента с атмосферой камеры. По окончании опыта содержимое камеры переносилось в колбу, куда добавлялось несколько миллилитров раствора МаОН, и отгонялся аммиак, находившийся в системе в виде аммоний- ных соединений, а также трансформированный аммиак, пред- <тавленный в системе амидными группами глутамина и аспа- рагина. Отгоняемый аммиак улавливался 0,1 н. Н»5О,, окис-. лялся в вакууме (10-°) гипобромитом натрия до элементарного азота, а затем определялся его изотопный состав на масс-спект- рометре. В ряде опытов определялось также содержание азота и его изотопный состав в остатке после отгона аммонийного и амидного азота. В таблицах 1 и 2 приведены данные, характе- ризующие активность отдельных ферментных препаратов. Меченый азот включался в значительных количествах в со- став аммонийной и амидной фракций. Включение No'5 в оста- точную фракцию азота (аминокислоты и белок) в течение З0-минутной экспозиции не происходило или’происходило в ог- раниченных размерах. Таким образом, выделенные препараты фермента катализи- руют @ уИго фиксацию атмосферного азота с образованием аммиака в качестве конечного неорганического продукта фик- сации. Неизмельченные клубеньки, изолированные от корней люпина за 24 часа до опыта, и взвесь` бактерий ВЫМлхоЫшт, выделенных из клубеньков люпина, не фиксировали азота. Удельная активность фермента обычно выражается числом оборотов, т..е. числом молей субстрата (в данном случае No,), прореагировавшего за 1 минуту с одним молем фермента. Для тех случаев, когда молекулярный вес фермента неизвестен, его принимают за 100 000. Следует отметить, что максимальное количество фиксиро- ванного азота в опытах Карнагана и в опытах Берриса и Виль- сона достигало 244 иг на 100 мг белка при экспозиции в атмо- сфере No!° в течение 30 минут (Карнаган), что соответствует удельной активности, т. е. примерно в 170 раз меньше, чем у выделенных нами препаратов ферментов А (табл. 2). Клубеньки бобовых представляют систему, включающую Сактериальные клетки КЫхоЫшт и перерожденную ткань выс- шего растения. Необходимо было установить, в Ккакой части 216