беньках бобовых растений. В результате были разработаны следующие методы. Отделенные от корней бобовых клубеньки замораживались жидким азотом и затем измельчались. Тонкоизмельченная масса клубеньков использовалась для извлечения азотфикси- рующего фермента непосредственно или предварительно экст- рагировалась ацетоном до полного обезвоживания и затем экст- рагировалась эфиром. В последнем случае получался порош- ковый продукт, который потом использовался для извлечения фермента. Измельченные клубеньки или полученный из них сухой по- рошок обрабатывались в течение 20 минут фосфатным буфе- ром рН 6,8 с добавкой аскорбиновой кислоты, центрифугиро- вались на суперцентрифуге с охлаждением в течение 15 минут при 10 000—12 000 е, и надцентрифужная жидкость, свободная от обломков тканей и клеток, использовалась для выделения фермента. Для этого к ней добавлялся насыщенный раствор сульфата магния с таким расчетом, "чтобы — содержание Ме50О,‹7НьО в жидкости составляло около 30%. В этих усло- виях выпадает тонкий осадок белка (фермент А), который от- деляется от раствора центрифугированием. В ряде опытов фер- мент А подвергался диализу против дистиллированной воды до полного удаления иона магния. Выход фермента очень мал: из 3 г сухой массы клубеньков люпина получалось 2,5— 4,5 мг отдиализованного препарата фермента с абсолютным со- держанием азота 0,4—0,7 мг. При кислотном гидролизе этого препарата в гидролизате хроматографическим методом были обнаружены аспарагиновая и глутаминовая’кислоты, аланин, глицин, треонин, серин, метионин, валин, тирозин, три.птофан‚ фенилаланин. Этот препарат фермента на данной стадии раз- работки нужно рассматривать не как чистый, индивидуальный фермент, а только как смесь белков, в составе которых пред-- ставлен и азотфиксирующий фермент. Кроме такого метода, применялся и другой — экстрагирова- ние измельченной сухой массы клубеньков водным 60%-ным этиловым спиртом; полученный экстракт использовался в опы- тах в качестве источников азотфиксирующего фермента. Испы- тания активности выделенных препаратов производились в гер- метической камере в атмосфере, обогащенной No2. Было най- дено, что азотфиксирующая активность препаратов фермента заметно повышается при добавлении некоторых веществ, могу- щих служить в качестве активаторов фермента, переносчиков водорода, акцепторов продуктов ферментативного синтеза и источника энергии. В качестве таких веществ применялись маг- ний, молибден, биотин, пируват, аскорбиновая кислота, АТФ. Все добавки вводились в камеру в буферном — фосфат- ном растворе рН 6,8 при общем объеме жидкости 35— 40 мл. 215