состоянию, что приведет к накладыванию эффектов повторного и предыдущего введения, имитирующему кумулятивность исследуемого соединения. Напротив, чрезмерно малые дозы могут не вызвать значимых изменений исследуемых функций в краткосрочном эксперименте, что потребует значительного увеличения его продолжительности. 4.2.2.2. В эксперименте следует использовать не менее трех доз веществ, одна из которых соответствует порогу однократного действия, выявляемому в предварительном опыте, а остальные определяются экспериментатором путем дробного снижения этой дозы (обычно в 5 - 10 раз). 4.2.2.3. С учетом существующих представлений о фазовости процессов первичной декомпенсации и компенсации в организме и с целью достаточно полного выявления токсикодинамики вещества общая длительность эксперимента должна составлять 20 - 30 суток. 4.2.2.4. Для оценки действия веществ при введении их в малых постоянных дозах следует использовать — градуированные эффекты, т.е. учитывать изменения — патогенетических показателей (соответствующих токсикодинамике веществ). Могут использоваться также высокочувствительные интегральные тесты, такие как: - изучение высшей нервной деятельности; - проба с бромсульфалеином; - витальное окрашивание тканей; - иммунологические методы (кожная микрофлора, завершенный фагоцитоз); - изучение системы "гипофиз - кора надпочечников" (17-кетостероиды в моче, масса и объем надпочечников, содержание в них аскорбиновой кислоты и включение радиофосфора); - исследование активности ключевых ферментов, в том числе проникающих в кровь при изменении проницаемости клеточных мембран тканей. 4.2.2.5. Контроль за развитием интоксикации должен осуществляться почасовой (1 - 3 - 6 - 12 - 24-й часы после введения вещества) и посуточный (на 1 - 5 - 10 - 15 - 20 - 30-е сутки наблюдения, начиная с 5-х суток) с учетом максимального изменения изучаемой функции в течение суток. 4.2.2.6. Результаты часовых и суточных определений изучающихся показателей ддолжны быть выражены в виде среднеэффективных доз - вероятностных величин типа эпсилон р ‚ © 50 расчетом стандартной ошибки методом пробит-анализа — (Литчфилда и Уилкоксона). При выборе "уровня" эффективной дозы необходимо учитывать значимость изменений изучающихся показателей: для некоторых функций изменение их первоначального ("нормального") уровня на 50 - 60% может быть несовместимо с жизнью, поэтому при оценке таких фУНКЦИЙ следует орисентироваться на их пороговые сдвиги и выражать регистрируемые изменения в виде величин эпсилон Р , эпсилон 2 , эпсилон ) , ..., эпсилон р (т - степень 5 10 20 та изменения величины показателя в %) . 4.2.2.7. Полученные изоэффективные величины эпсилон 0 для различных (суточных) периодов наблюдения эпсилон О , где п - число п суток от начала введения вешества, должны быть представлены в виде вероятностной изоэффективной кривой в трехкоординатной системе доза - эффект - время. Это позволяет оценить соотношение процессов полома функций и ответных адаптационных реакций организма и их фазовость, а также прогнозировать дальнейший ход интоксикации по изменениям, выявленным в ее начальной стадии. 4.2.2.8. Прогноз параметров хронической токсичности проводится на основе изоэффективной кривой (п. 4.2.2.7) путем графической экстраполяции величины эффекта вещества в начальной стадии интоксикации на отдаленные сроки. При этом следует учитывать, что наименьшая величина эпсилон Ю , полученная в 20 - 30-суточном 14