После отбора икры в чашке Петри их определяют на наличие оплодотворения и
дефектов. Это проверяется с помощью инвертированного микроскопа или бинокуляра с
функциями не ниже 25-кратного увеличения изображения (Гаттег ег а!., 2009).
Оплодотворенная икра характеризуется прозрачностью пространства под хорионом. В
этом пространстве содержатся желток и зародышевый диск. После оплодотворения
деление клеток происходит спустя 15 минут после оплодотворения при температуре
26 °С. В зародышевом диске происходит деление бластомеров в первые 3-4 часа после
оплодотворения, где число бластомеров удваивается и уплощается бластодиск. Поэтому
на этапе дробления бластомеров вполне можно отличить от неоплодотворенной икры, у
которой отсутствуют бластомеры, а на более поздних этапах становится непрозрачной
(Киите! ег а!., 1995). Кроме того, обычно отсеивают икру с явно выраженными
дефектами, такими как асимметрия, образование пузырьков, повреждение мембран.
Далее 
после 
отбора 
оплодотворенной 
икры 
производят 
ее 
перенос 
на
микротитрационные 
планшеты 
(обычно 
на 
24 
лунки), 
которые предварительно
заполнены тестируемым веществом с различными концентрациями и контрольными
водами. Материал планшета предпочтителен преимущественно из стекла, так как такой
материал не адсорбирует остаточные концентрации загрязнителей, которые могут
повлиять на результаты тестирования. Обычно ксенобиотики рекомендуется тестировать
в 5 концентрациях, однако в случае с тестированием качества вод или экстрактов донных
отложений достаточно одной искомой концентрации в нескольких повторах. Причем
пробы обычно отбирают у водоемов в нескольких местах, поскольку загрязнения могут
распределяться неравномерно.
Далее после распределения икры планшеты накрывают самоклеющейся фольгой
и инкубируют при 26 °С в течение 24, 48, 72, 96, 108 и более часов. На протяжении всего
периода инкубирования фиксируются летальные и сублетальные конечные точки. В
качестве летальных точек оценивается коагуляция икры (гибель эмбриона), отсутствия
вылупления из оболочки икры, отделения хвоста, образования сомитов и сердцебиения.
В качестве сублетальных конечных точек оценивается образование отеков, завершение
гаструляции, 
изменение 
кровообращения/частоты 
сердцебиения. 
Наиболее 
часто
наблюдают тератогенные изменения, такие как отек перикарда, желточного мешочка,
головного мозга, деформации глаз, хвоста, позвоночника (Таттег ег а!., 2009).
На этапах развития вылупления из икры и развития предличинки (обычно 48-72
часа с момента оплодотворения и позже) применимы технологии, с помощью которых
возможно — вычислить 
размеры 
и — площади — интересующих — морфологических
характеристик. 
Для этого 
во 
время 
биотестирования проводится фотофиксация
изображения эмбрионов 
с 
помощью микроскопа, 
затем снимки редактируют 
в
программном обеспечении Гтаге.), которое доступно в сети интернет без установки на
персональный компьютер (Нопе е{ а!., 2024; ОКГ: Бир$://)лтуоу.ло). С помощью
инструментов этого программного обеспечения можно измерить точную длину
эмбрионов 
относительно 
друг друга, 
измерить 
размеры 
отеков, 
отклонений 
в
морфологии, размеры отдельных органов и т. д. Таким образом, благодаря этому
инструментарию, возможно собрать наиболее точную и подробную характеристику
развития эмбрионов в процессе биотестирования и определить степень воздействия тех
или иных экстрактов донных отложений (сточных вод).
Нельзя также не отметить, что процедура биотестирования сама по себе весьма
трудоемка, не говоря о трудовых затратах на содержание аквариального вивария и
нересте нового поколения рыб перед биотестированием. В связи с этими причинами, а
также по причине огромного количества различных тестируемых соединений в наши дни
уже обсуждаются и разрабатываются технологии высокопроизводительных тестов,
основанных на процессах автоматизации для ускорения процессов биотестирования.
427